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熒光定量pcr

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熒光定量pcr

  • 所屬分類:常規分子生物學技術

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  • 發布日期:2018/11/20
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詳細介紹

熒光定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qPCR) 是快速檢測基因表達水平的首選方法。qPCR原理易懂結果難做,費時耗力,xrk向日葵app生物可依據客戶需求和實驗目的,為您設計切實可行的實驗方案,穩定的實驗操作,詳實的實驗報告,幫您完美解決qPCR實驗的一切問題!

 

技術原理

通過熒光染料或熒光標記的特異性探針,對PCR產物進行標記跟蹤,實時監控反應過程,隨著 PCR 反應的進行,反應產物不斷累積,熒光信號強度也等比例增加。每經過一個循環,收集一次熒光強度信號,這樣就可以通過熒光強度變化監測產物量的變化,結合相應的軟件對產物進行分析,可以得到一條熒光擴增曲線,計算待測樣品初始模版的量。實時熒光定量PCR技術是一次由定性技術向定量技術的飛躍,運用該項技術,可以對DNA、RNA樣品進行相對、絕對定量和定性分析。

 

技術流程

SYBR Green I 法

熒光染料SYBR Green:嵌入到雙鏈DNA分子後構象發生變化,能夠吸收497nm的激發光並發出520nm的熒光;而不摻入DNA雙鏈中的染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。

基因表達定量

1. 根據目的基因序列設計特異性的引物和熒光探針。

2. 提取DNA/ RNA,紫外分光光度計檢測其完整性和濃度,反轉錄酶將RNA反轉錄為cDNA。

3. 引物預實驗,篩選出特異性很強的引物。

4. 熒光定量PCR,采用雙標準曲線法,結合內參與目的基因的CT值,進行實驗結果分析。

5. 實驗完成後,提供完整的實驗報告結果(含軟件分析結果)及引物等相關實驗材料。


技術優勢

1. 實時監測:通過擴增曲線可以實時動態地觀察反應整個過程;

2. 線性範圍:從10^2到8次方的廣度範圍;

3. 重複性好:重複反應的Ct值誤差≤ 0.5Ct;

4. 特異性強:特異性引物、優化的反應條件決定了單一的溶解曲線;

5. 高通量反應:9500熒光定量係統一次可進行96個反應。


送樣要求

1、細胞(≥10的7次方)、組織(≥300mg)、血液(≥1 ml)、葉片(若幹)等樣品材料;

2、總RNA量大於5ug或者mRNA大於200ng( 注:OD260/OD280在1.9-2.1之間,完整性好);DNA:總DNA大於5ug(OD260/OD280在1.7-1.9之間,完整性好);

3、提供盡可能詳細的背景資料:樣品來源、目的基因豐度等;

4、引物、探針、標準品(可由客戶自己提供,也可由公司直接設計提供);


交付結果

1、實驗所需的試劑和儀器說明

2、RNA或DNA提取質量檢測電泳圖

3、定量檢測原始數據(包括擴增曲線、溶解曲線)

4、詳細的項目結題報告(包括實驗報告和結果分析報告


實驗結果展示

表觀組學技術服務 

絕對定量—標準品稀釋梯度樣品擴增曲線


基因表達調控 

目的基因


基因表達定量 

內參基因


本文網址:http://www.celebsonice.com/product/569.html

關鍵詞:基因表達定量,表觀組學技術服務,基因表達定量

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